有关三黄软膏治疗急性软组织损伤的实验研究
三黄软膏是浙江省中医院的医院制剂散瘀膏,在临床应用30余年,治疗急性软组织损伤患者达数万人,疗效显著［1］。本实验通过提取散瘀膏药物的有效成分，从损伤证候评估、损伤局部组织前列腺素E2(PGE2)的含量的测定来阐明其对急性软组织损伤的疗效，现将实验结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 实验动物 健康SD大鼠180±10g 36只，雌雄各半，浙江医学科学院实验动物中心提供。饲养期间给予啮齿类动物标准颗粒饲料及自由饮水。
1.2 药品及试剂 ①三黄软膏由浙江中医药大学药学院提供;②青鹏膏：西藏林芝奇正藏药厂，批号：0703060239;③Rat PGE2 ELISA Kit: 美国Cayman公司。批号:180174。
1.3 实验动物造模及分组 将实验组30只SD大白鼠在实验前一天用8%硫化钠溶液双腿去毛。实验前一天禁食禁水。用3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉（注射剂量：1.5ml/kg），麻醉成功后将大鼠固定在自制打击器上,将200g重的砝码通过与砝码直径相当的塑料管中自20cm高处垂直自由落在大鼠小腿后侧,踝关节上2.5cm处,连续打击2次,打击面积约1×2cm2，30min后可见打击局部出现散在出血点,皮下瘀肿创面，但皮肤完整无破损且无骨折的急性软组织损伤动物模型。将造模成功的大鼠半小时后按随机数字表法分为模型对照组（B）6只,给予布胶外敷;基质对照组（C）6只,给予基质1.6g/kg，后用布胶固定;青鹏膏对照组（D）6只,给予青鹏膏1.6 g/kg，后用布胶固定;三黄软膏低剂量组（E）6只,给予三黄软膏1.6 g/kg，后用布胶固定;三黄软膏高剂量（F）组各6只,给予三黄软膏3.2g/kg，后用布胶固定。换药1次/d。正常组（A）：给予正常饲养。
1.4 损伤证候评估 参考冯芳军等［2］损伤证候指数，观察伤肢肿胀和瘀斑等证候表现，并评分。①皮下瘀血:多量块状计2 分，少量点状计1 分，无瘀血者计0 分。②下肢肿胀:明显肿胀计2 分，稍有肿胀计1 分，无肿胀者计0 分。③皮肤颜色:紫暗色深计2 分，暗红色浅计1 分，色泽正常计0分。计算总积分。每天观察记录1次。总［文章来源于 mip.qwen.cn］积分＝（左腿积分＋右腿积分）/2。
1.5 前列腺素E2(PGE2)含量的测定 于造模后3d、5d分别于各组中任取3只大鼠处死，用手术刀切开大鼠受打击部位皮肤，分离皮下组织，切取受打击部位的中心（踝关节上2.5cm处）呈青紫色的肌肉组织，用生理盐水漂洗1min，滤纸吸干，分析天平称取100±5mg，每10mg组织加入生理盐水0.5ml，于匀浆器中缓慢而均匀地研磨15min，至匀浆液呈均匀一致悬浊液，倒入试管中，在高速冷冻离心机以2500r/min 离心15min，收集上清液，置-20℃冰箱中备用。用ELISA法测定PGE2的含量。具体操作步骤按照试剂盒要求完成。
1.6 统计方法 所有数据以“平均数±标准差”（x±s）表示，多组计量资料采用单因素方差分析，两两比较用LSD检验。所有统计学处理在SPSS 13.0统计软件上完成。
2 结果
2.1 损伤证候评估 造模后第1天各组大鼠的损伤证候指数基本相同，组间比较无显著性差异（P>0.05）；治疗3d后，各组的损伤证候指数较造模1天后有所下降，同时D组、E组及F组的损伤证候指数明显小于同期的B组和C组（P<0.05），而D组、E组及F组之间损伤证候指数基本相同，无显著性差异（P>0.05），B组和C组之间损伤证候指数基本相同，无显著性差异（P>0.05）；治疗5d后各组的损伤证候指数较治疗3d后有所下降，与同期的B组和C组相比，D组、E组和F组的损伤证候指数有明显下降，显著性差异明显（P<0.05），而D组、E组及F组之间损伤证候指数基本相同，无显著性差异（P>0.05），B组和C组之间损伤证候指数基本相同，无显著性差异（P>0.05）。各组损伤指数见表1。
表1 各组急性软组织损伤治疗后不同时期的损伤证候指数（略）
2.2 大鼠局部PGE2的含量 治疗3d后，A组与B组、C组比较存在显著性差异（P<0.05），而与D组、E组和F组比较无显著性差异（P>0.05）；B组、C组与D组、E组和F组比较存在显著性差异（P<0.05），而B组与C组比较无显著性差异（P>0.05）。
治疗5d后，A组与B组、C组比较无显著性差异（P>0.05），而与D组、E组和F组比较存在显著性差异（P<0.05）；B组、C组与D组、E组和F组比较存在显著性差异（P<0.05），而B组与C组比较无显著性差异（P>0.05）；而D、E组和F组之间比较无显著性差异（P>0.05）。见表2。
表2 治疗3、5天后各组组织PGE2含量的改变（略）
3 讨论
前列腺素E2(PGE2)是重要的炎性介质，具有多种生物活性,参与各种病理生理过程。前列腺素E2在体内分布广泛,它是具有重要生物学活性的前列腺素物质,具有胃黏膜保护、增加肾血流量、扩张血管、促进排钠利尿、抗血小板聚集、参与炎症反应等功能。前列腺素E2持久而广泛血管扩张、致痛、影响免疫功能，在创伤中起重要作用。炎症与血管生成是损伤及修复的重要病理基础，神经分布也伴随血管生成，压力、缺氧刺激新的神经，炎症使神经变得敏感，引起疼痛［3］。PGE2能影响血管通透性,使血管扩张，毛细血管通透性增加，从而引起局部水肿及组织器管损伤。三黄软膏以“活血化瘀，凉血消肿止痛”为治则。选用大黄为方中君药，具有活血化瘀、泻热通便、凉血解毒、逐瘀通经之功；黄芩消肿止血、清热燥湿、泻火解毒之效，是为臣药；黄柏具有清热燥湿、泻火除湿、解毒疗疮之功效，为佐药；玄明粉润燥软坚、清火消肿为使药，诸药合用，共奏活血袪瘀、凉血止痛、消肿散结之功效。
通过动物实验发现,三黄软膏对闭合的急性软组织损伤大鼠具有治疗作用。它能够缓解损伤局部的症状,明显抑制损伤局部的PGE2的含量,减少损伤局部的炎症反应。三黄软膏对闭合的急性软组织损伤大鼠具有治疗作用可能与抑制损伤局部的PGE2的含量有关,但其确切的作用机理有待进一步的研究。
【参考文献】
［1］ 童培建，周林宽，徐农，等.散瘀膏治疗踝关节扭伤临床观察［J］.浙江中医学院学报，1994，18（1）：122.
［2］ 冯芳军,杨毓华,苏荣梅.中药外治大鼠软组织损伤的实验研究［J］.颈腰痛杂志，2002,23(3): 206209.
［3］ Bonnet CS,Wash DA.Ostearthritis angiogenesis and inflammation［J］.Rheumatology，2005，44(1)：716.